医学实验室ISO 15189认可指导丛书临床微生物检验标准化操作程序 本书特色
“医学实验室ＩＳＯ１５１８９认可指导丛书”以ＣＮＡＳ ＣＬ０２：２０１２《医学实验室质量和能力 认可准则》为指导，由全国医学检验各专业领域的专家共同编写，对开展ＩＳＯ１５１８９医学实验 室认可有重要的指导意义和实用价值。 本书共分２篇２０章。*篇为管理要求，主要介绍组织和管理、质量管理和实验室安全 管理等方面的操作程序。第二篇为技术要求，从标本采集、临床标本的细菌学检验、抗菌药物 敏感试验等方面来阐述临床微生物实验室相关操作规程，包括检验前质量管理、实验室仪器设 备、常用培养基及试剂、血清学试验、微生物相关抗体抗原检测、各种染色方法、各种标本的涂 片镜检与培养、常见病原菌及高致病菌检验、手工检验人员比对与仪器性能验证等标准操作规 程。附录部分不仅收录了实验室管理、仪器和设备以及质量控制等方面常用的记录表格，方便 读者直接引用，而且列举了微生物室现场评审不符合项等，有利于读者借鉴和参考，指导作用 突出。 本书内容全面，编排格式规范，言简意赅，指导性强，可作为正在准备或已经通过ＩＳＯ １５１８９认可的医院临床微生物实验室的指导书，又可作为基层医院微生物室常规工作的管理 规范和操作手册，还可作为临床微生物专业学习的培训教材。
医学实验室ISO 15189认可指导丛书临床微生物检验标准化操作程序 内容简介
“医学实验室ＩＳＯ１５１８９认可指导丛书”以ＣＮＡＳ ＣＬ０２：２０１２《医学实验室质量和能力 认可准则》为指导，由全国医学检验各专业领域的专家共同编写，对开展ＩＳＯ１５１８９医学实验 室认可有重要的指导意义和实用价值。 本书共分２篇２０章。篇为管理要求，主要介绍组织和管理、质量管理和实验室安全 管理等方面的操作程序。第二篇为技术要求，从标本采集、临床标本的细菌学检验、抗菌药物 敏感试验等方面来阐述临床微生物实验室相关操作规程，包括检验前质量管理、实验室仪器设 备、常用培养基及试剂、血清学试验、微生物相关抗体抗原检测、各种染色方法、各种标本的涂 片镜检与培养、常见病原菌及高致病菌检验、手工检验人员比对与仪器性能验证等标准操作规 程。附录部分不仅收录了实验室管理、仪器和设备以及质量控制等方面常用的记录表格，方便 读者直接引用，而且列举了微生物室现场评审不符合项等，有利于读者借鉴和参考，指导作用 突出。 本书内容全面，编排格式规范，言简意赅，指导性强，可作为正在准备或已经通过ＩＳＯ １５１８９认可的医院临床微生物实验室的指导书，又可作为基层医院微生物室常规工作的管理 规范和操作手册，还可作为临床微生物专业学习的培训教材。
医学实验室ISO 15189认可指导丛书临床微生物检验标准化操作程序 目录
**篇管理要求 / 001
**章·组织和管理002
**节微生物实验室硬件设置及管理程序 / 003
实验室设施和环境条件 / 003
实验室设备管理程序 / 005
实验室试剂及耗材管理程序 / 008
第二节微生物实验室人员岗位设置及管理 / 010
人员配置基本要求 / 010
人员岗位职责设置程序 / 011
人员培训及能力评估程序 / 014
实验室与临床沟通程序 / 016
第二章·质量管理程序017
**节质量保证程序 / 018
能力验证活动管理程序 / 018
室内质量控制管理程序 / 020
质量改进程序 / 025
质量风险评估和风险管理程序 / 027
第二节微生物检验方法学性能评价 / 029
微生物检验方法学性能验证程序 / 029
微生物实验室内人员比对程序 / 031
微生物实验室间比对程序 / 032
第三章·安全风险评估与生物防护033
**节微生物实验室安全风险评估及管理 / 034
实验室风险评估程序 / 034
二级生物安全管理程序 / 036
疑似高致病性微生物标本管理程序 / 039
第二节微生物实验室生物防护及其管理 / 040
实验室防护和应急管理程序 / 040
菌种管理程序 / 042
危险性化学品使用管理程序 / 043
检验后标本保存和处理程序 / 045
废弃物处理程序 / 046
消毒灭菌管理程序 / 047
职业暴露处理程序 / 048
传染性病原微生物报告的管理程序 / 049
第二篇技术要求 / 051
第四章·检验前质量管理052
**节标本采集前程序 / 053
微生物检验项目申请程序 / 053
微生物检验标本条形码程序 / 054
采样前患者识别程序 / 055
第二节标本采集及送检程序 / 056
标本采集、运送、保存程序 / 056
标本接收、标识及信息录入程序 / 060
标本拒收程序 / 061
第五章·微生物实验室仪器设备标准操作规程063
**节一般仪器设备的标准操作规程 / 064
恒温培养箱标准操作规程 / 064
CO2培养箱标准操作规程 / 066
厌氧培养系统标准操作规程 / 068
真菌培养箱标准操作规程 / 071
生物安全柜标准操作规程 / 073
普通光学显微镜标准操作规程 / 075
荧光显微镜标准操作规程 / 077
普通冰箱标准操作规程 / 079
低温冰箱标准操作规程 / 080
普通离心机标准操作规程 / 082
Cytospin 4细胞涂片机标准操作规程 / 084
普通移液器标准操作规程 / 086
连续加样移液器标准操作规程 / 088
电热高温接种灭菌器标准操作规程 / 090
旋涡混合器标准操作规程 / 091
恒温水浴箱标准操作规程 / 092
pH计标准操作规程 / 093
游标卡尺标准操作规程 / 095
电子天平标准操作规程 / 096
压力蒸汽灭菌器标准操作规程 / 098
比浊仪标准操作规程 / 100
第二节血培养仪标准操作规程 / 101
BacT/ALERT 3D血培养仪标准操作规程 / 101
BACTEC 9000血培养仪标准操作规程 / 104
BACTEC FX血培养仪标准操作规程 / 107
VersaTREK血培养仪标准操作规程 / 110
DLBt全自动血培养系统标准操作规程 / 113
LABSTAR血培养仪标准操作规程 / 116
AutoBC System全自动血培养系统标准化操作规程 / 119
第三节微生物鉴定仪器标准操作规程 / 121
VITEK 2全自动微生物鉴定仪标准操作规程 / 121
BD Phoenix全自动微生物鉴定仪标准操作规程 / 125
WalkAway系列全自动细菌鉴定和药敏分析仪标准操作规程 / 129
Biofosun微生物鉴定药敏分析系统标准操作规程 / 133
DL96细菌测定系统标准操作规程 / 137
XK细菌鉴定药敏分析系统标准操作规程 / 139
第四节其他仪器标准操作规程 / 142
PREVI Isola全自动平板接种仪标准操作规程 / 142
Probact System自动化细菌分离培养系统标准操作规程 / 145
LARK全自动平板接种仪标准化操作规程 / 147
云鲁合Hawk系列全自动微生物样本处理系统标准操作规程 / 149
MB80微生物快速动态检测标准操作规程 / 151
第六章·常用培养基及试剂标准操作规程154
**节培养基标准操作规程 / 155
营养琼脂培养基配制标准操作规程 / 155
血琼脂培养基配制标准操作规程 / 156
巧克力培养基配制标准操作规程 / 157
麦康凯琼脂培养基配制标准操作规程 / 158
TCBS琼脂培养基配制标准操作规程 / 159
淋球菌培养基配制标准操作规程 / 160
MH培养基配制标准操作规程 / 161
HTM培养基配制标准操作规程 / 162
CaryBlair转运培养基配制标准操作规程 / 163
营养肉汤培养基配制标准操作规程 / 164
牛脑心浸液培养基配制标准操作规程 / 165
厌氧血琼脂培养基配制标准操作规程 / 166
L型细菌固体培养基配制标准操作规程 / 167
沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂培养基配制标准操作规程 / 168
第二节常用生化试验标准操作规程 / 169
触酶试验标准操作规程 / 169
氧化酶试验标准操作规程 / 170
凝固酶试验标准操作规程 / 171
DNA酶试验标准操作规程 / 172
CAMP试验标准操作规程 / 173
反向CAMP试验标准操作规程 / 174
β内酰胺酶试验标准操作规程 / 175
新生霉素敏感试验标准操作规程 / 176
Optochin敏感试验标准操作规程 / 177
卫星试验标准操作规程 / 178
嗜血杆菌因子试验标准操作规程 / 179
胆汁溶菌试验标准操作规程 / 180
葡萄糖O/F试验标准操作规程 / 181
克氏双糖铁试验标准操作规程 / 182
三糖铁试验标准操作规程 / 183
七叶苷试验标准操作规程 / 185
吲哚试验标准操作规程 / 186
硝酸盐还原试验标准操作规程 / 187
脲酶试验标准操作规程 / 189
赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程 / 190
鸟氨酸脱羧酶试验标准操作规程 / 191
精氨酸双水解酶试验标准操作规程 / 192
苯丙氨酸脱氨酶试验标准操作规程 / 193
枸橼酸盐利用试验标准操作规程 / 194
丙二酸盐利用试验标准操作规程 / 195
硫化氢试验标准操作规程 / 196
4％氢氧化钾拉丝试验标准操作规程 / 197
第七章·血清学试验标准操作规程198
**节肠道致病菌血清学试验标准操作规程 / 199
沙门菌血清学检测标准操作规程 / 199
志贺菌血清学检测标准操作规程 / 200
致病性大肠埃希菌血清学检测标准操作规程 / 201
O157：H7出血性大肠埃希菌血清学检测标准操作规程 / 202
O1群、O139群霍乱弧菌血清学检测标准操作规程 / 203
第二节其他血清学试验标准操作规程 / 204
链球菌血清学检测标准操作规程 / 204
第八章·微生物相关抗体抗原检测标准操作规程205
**节微生物相关抗体检测标准操作规程 / 206
结核分枝杆菌抗体血清学检测标准操作规程 / 206
军团菌抗体检测标准操作规程 / 208
肺炎支原体抗体检测标准操作规程 / 209
人型支原体抗体检测标准操作规程 / 210
解脲脲原体抗体检测标准操作规程 / 211
梅毒反应素抗体检测标准操作规程 / 212
梅毒密螺旋体抗体检测标准操作规程 / 213
肥达反应标准操作规程 / 214
冷凝集试验标准操作规程 / 216
第二节微生物相关抗原检测标准操作规程 / 217
沙眼衣原体抗原检测标准操作规程 / 217
隐球菌抗原乳胶凝集试验标准操作规程 / 218
隐球菌抗原检测标准操作规程 / 219
尿肺炎链球菌抗原检测标准操作规程 / 221
细菌性阴道炎唾液酸酶检测标准操作规程 / 222
第九章·各种染色方法标准操作规程223
**节细菌染色标准操作规程 / 224
革兰染色标准操作规程 / 224
瑞氏染色标准操作规程 / 226
抗酸染色标准操作规程 / 227
荧光染色标准操作规程 / 229
鞭毛染色标准操作规程 / 231
潘本汉染色标准操作规程 / 232
第二节真菌染色标准操作规程 / 233
耶氏肺孢子菌瑞氏吉姆萨染色标准操作规程 / 233
隐孢子菌——改良抗酸染色标准操作规程 / 235
墨汁染色标准操作规程 / 236
乳酸酚棉蓝染色标准操作规程 / 237
过碘酸希夫染色标准操作规程 / 238
六胺银染色标准操作规程 / 240
真菌钙荧光白染色标准操作规程 / 242
真菌KOH压片标准操作规程 / 243
第十章·各种标本的涂片镜检与培养标准操作规程245
**节各种标本的涂片镜检标准操作规程 / 246
脑脊液涂片标准操作规程 / 246
粪便涂片标准操作规程 / 247
穿刺液涂片标准操作规程 / 248
脓液及伤口分泌物涂片标准操作规程 / 249
褥疮溃疡标本涂片标准操作规程 / 250
尿标本涂片标准操作规程 / 251
生殖系统标本涂片标准操作规程 / 252
前列腺分泌物涂片标准操作规程 / 253
痰标本涂片标准操作规程 / 254
支气管肺泡灌洗液、保护毛刷标本涂片标准操作规程 / 256
鼻腔、鼻咽、咽喉分泌物涂片标准操作规程 / 257
眼部分泌物涂片标准操作规程 / 258
耳分泌物涂片标准操作规程 / 259
口腔标本涂片标准操作规程 / 260
胃液标本涂片标准操作规程 / 261
第二节各种类型标本培养标准操作规程 / 262
血液及骨髓标本培养标准操作规程 / 262
脑脊液标本培养标准操作规程 / 266
痰、支气管肺泡灌洗液、保护毛刷标本培养标准操作规程 / 269
鼻腔、鼻咽、咽喉分泌物标本培养标准操作规程 / 277
眼部标本培养标准操作规程 / 280
耳部标本培养标准操作规程 / 282
穿刺液标本培养标准操作规程 / 284
引流液标本培养标准操作规程 / 287
尿液标本培养标准操作规程 / 289
生殖道标本培养标准操作规程 / 293
粪便标本培养标准操作规程 / 296
脓及伤口标本培养标准操作规程 / 299
褥疮溃疡标本培养标准操作规程 / 302
中心静脉导管标本培养标准操作规程 / 304
组织标本培养标准操作规程 / 307
前列腺标本培养标准操作规程 / 310
人体植入物标本培养标准操作规程 / 313
腹透液标本培养标准操作规程 / 316
第十一章·常见病原菌及高致病菌检验标准操作规程318
**节常见病原菌检验标准操作规程 / 319
葡萄球菌属检验标准操作规程 / 319
微球菌属检验标准操作规程 / 322
链球菌属检验标准操作规程 / 324
肠球菌属检验标准操作规程 / 327
奈瑟菌属检验标准操作规程 / 329
卡他莫拉菌检验标准操作规程 / 331
棒状杆菌属检验标准操作规程 / 333
李斯特菌属检验标准操作规程 / 335
丹毒丝菌属检验标准操作规程 / 337
诺卡菌属检验标准操作规程 / 339
马杜拉放线菌属检验标准操作规程 / 341
埃希菌属检验标准操作规程 / 343
致病性大肠埃希菌检验标准操作规程 / 345
沙门菌属检验标准操作规程 / 347
志贺菌属检验标准操作规程 / 349
克雷伯菌属检验标准操作规程 / 351
肠杆菌属检验标准操作规程 / 353
沙雷菌属检验标准操作规程 / 355
变形杆菌属检验标准操作规程 / 357
摩根菌属检验标准操作规程 / 359
枸橼酸杆菌属检验标准操作规程 / 361
耶尔森菌属检验标准操作规程 / 363
副溶血弧菌检验标准操作规程 / 365
邻单胞菌属检验标准操作规程 / 367
气单胞菌属检验标准操作规程 / 369
假单胞菌属检验标准操作规程 / 371
产碱杆菌属检验标准操作规程 / 373
不动杆菌属检验标准操作规程 / 375
色杆菌属检验标准操作规程 / 377
金黄杆菌属检验标准操作规程 / 379
莫拉菌属检验标准操作规程 / 381
嗜血杆菌属检验标准操作规程 / 383
军团菌属检验标准操作规程 / 385
弯曲菌属检验标准操作规程 / 387
螺杆菌属检验标准操作规程 / 389
第二节高致病菌检验标准操作规程 / 391
布鲁菌属检验标准操作规程 / 391
弗朗西斯菌属检验标准操作规程 / 393
鼠疫耶尔森菌检验标准操作规程 / 395
霍乱弧菌检验标准操作规程 / 397
炭疽芽孢杆菌检验标准操作规程 / 399
第十二章·抗菌药物敏感试验标准操作规程401
**节抑菌试验标准操作规程 / 402
KB法标准操作规程 / 402
稀释法标准操作规程 / 405
浓度梯度扩散法（Etest）标准操作规程 / 406
棋盘格法联合药敏试验标准操作规程 / 407
第二节临床常见菌抗菌药物敏感试验标准操作规程 / 408
肠杆菌科纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 408
假单胞菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 409
不动杆菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 410
嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 411
洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 412
葡萄球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 413
肠球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 414
链球菌属纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 415
脑膜炎奈瑟菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 417
淋病奈瑟菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 418
流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌纸片扩散法药物敏感试验标准操作规程 / 419
产色素头孢菌素试验标准操作规程 / 420
超广谱β内酰胺酶测定标准操作规程 / 421
耐甲氧西林葡萄球菌纸片扩散法筛选试验标准操作规程 / 423
耐万古霉素肠球菌筛选试验标准操作规程 / 424
诱导性β内酰胺酶试验标准操作规程 / 425
诱导性克林霉素耐药试验标准操作规程 / 426
改良Hodge试验标准操作规程 / 427
第十三章·分枝杆菌实验诊断标准操作规程428
标本采集及处理标准操作规程 / 429
抗酸杆菌涂片镜检标准操作规程 / 431
分枝杆菌属检验标准操作规程 / 433
快速生长分枝杆菌检验标准操作规程 / 436
第十四章·厌氧菌检验标准操作规程438
标本采集及处理标准操作规程 / 439
厌氧菌检验标准操作规程 / 441
第十五章·临床真菌标本实验诊断标准操作规程445
**节真菌标本采集及检验标准操作规程 / 446
标本采集及处理标准操作规程 / 446
真菌涂片标准操作规程 / 448
第二节真菌常用鉴定方法标准操作规程 / 451
透明胶带法丝状菌镜检标准操作规程 / 451
真菌小培养标准操作规程 / 452
第三节真菌药物敏感试验标准操作规程 / 454
念珠菌药敏试验标准操作规程 / 454
真菌Etest药敏试验标准操作规程 / 456
ATB FUNGUS 3标准操作规程 / 460
第十六章·非培养辅助检测标准操作规程461
**节细菌非培养辅助检测标准操作规程 / 462
革兰阴性菌脂多糖检测标准操作规程 / 462
降钙素原（PCT）检测标准操作规程 / 464
C反应蛋白（CRP）检测标准操作规程 / 467
第二节真菌非培养辅助检测标准操作规程 / 469
真菌β（1，3）D葡聚糖检测标准操作规程 / 469
曲霉菌半乳甘露聚糖检测标准操作规程 / 471
隐球菌荚膜多糖检测标准操作规程 / 474
第十七章·质谱及分子生物学鉴定标准操作规程477
**节细菌及真菌测序鉴定标准操作程序 / 478
细菌16Sr DNA测序鉴定标准操作程序 / 478
真菌ITS/D2测序鉴定标准操作程序 / 481
第二节质谱鉴定细菌及酵母菌标准操作规程 / 484
MALDITOFMS质谱鉴定细菌及酵母菌标准操作规程 / 484
第十八章·检验程序性能验证486
**节显微镜检查的性能验证 / 487
浓缩标本显微镜检查性能验证 / 487
非浓缩标本显微镜检查性能验证 / 489
第二节显微镜检查的人员比对 / 490
革兰染色涂片检查人员比对 / 490
抗酸染色涂片检查人员比对 / 492
特殊染色涂片检查人员比对 / 494
痰标本质量评估人员比对 / 496
第三节血培养仪性能验证 / 498
血培养仪性能验证 / 498
A血培养仪与B血培养仪性能比对 / 502
第四节一般培养性能验证及人员比对 / 504
一般培养的性能验证 / 504
结核分枝杆菌培养的性能验证 / 506
标本分离培养人员比对 / 508
标本定量培养计数人员比对 / 510
培养结果判读人员比对 / 512
第五节选择性平板性能验证 / 514
XLD琼脂平板性能验证 / 514
SS琼脂平板性能验证 / 515
麦康凯琼脂平板性能验证 / 516
巧克力琼脂平板性能验证 / 517
第六节非选择性平板性能验证 / 518
血琼脂平板性能验证 / 518
沙保弱琼脂平板性能验证 / 519
第七节临床微生物鉴定程序性能验证 / 520
微生物鉴定仪性能验证 / 520
MALDITOFMS质谱仪性能验证 / 522
定量接种环性能验证 / 524
志贺菌血清学试验性能验证 / 526
沙门菌血清学试验性能验证 / 527
致病性大肠埃希菌血清学试验性能验证 / 528
O157：H7出血性大肠埃希菌血清学试验性能验证 / 529
第八节血清学试验人员比对 / 530
志贺菌血清学试验人员比对 / 530
沙门菌血清学试验人员比对 / 532
致病性大肠埃希菌血清学试验人员比对 / 534
O1群、O139群霍乱弧菌血清学试验人员比对 / 536
第九节药敏试验的性能验证 / 538
全自动微生物药敏试验性能验证 / 538
KB法药敏试验性能验证 / 540
KB法药敏试验测量抑菌圈直径人员比对 / 542
第十节不同仪器/方法的性能比对 / 544
A微生物鉴定和药敏仪与B微生物鉴定和药敏仪性能验证比对 / 544
质谱仪与自动微生物鉴定仪比对 / 550
第十九章·检验后结果报告及资料处理程序552
**节报告程序 / 553
结果报告程序 / 553
危急值报告程序 / 555
第二节结果发布标准程序 / 556
分级报告程序 / 556
传染病报告程序 / 557
更改报告程序 / 558
细菌耐药监测与上报程序 / 559
第二十章·菌种保存程序560
需氧菌种保存程序 / 561
厌氧菌种保存程序 / 563
结核分枝杆菌保存程序 / 564
真菌菌种保存程序 / 565
附录566
一、 实验室记录表格 / 567
二、 现场评审不符合项举例 / 602
医学实验室ISO 15189认可指导丛书临床微生物检验标准化操作程序 作者简介
周庭银：海军军医大学附属长征医院实验诊断科主任技师。从 事临床微生物检验及科研工作４０余年，在临床微生物鉴定 方面积累了丰富的经验，尤其是对疑难菌、少见菌株鉴定的 研究有独到之处。在国内首次发现卫星状链球菌、星座链球 菌、霍氏格里蒙菌、拟态弧菌等多株新菌株。近年来先后帮 助国内多家医院鉴定４０余株疑难菌株。主办国家医学继续 教育“疑难菌株分离与鉴定”学习班２２期（培训２８００余人）， ２０１３年发起成立上海疑难菌读片会，并已成功举办１５期。 成功研究并解决了血培养瓶内有细菌生长，但革兰染色看不 到菌、转种任何平板无细菌生长这一难题。研制了新型双向 显色血培养瓶、多功能体液显色培养瓶、尿培养快速培养基、 抗酸杆菌消化液，以及一种既适用于痰细菌培养，又适用于 结核分枝杆菌和抗酸杆菌培养的痰标本液化留置容器。 获国家实用新型专利５项、发明专利１项。主编临床微 生物学专著１１部，其中《临床微生物学诊断与图解》获华东 地区科技出版社优秀科技图书一等奖。总主编“医学实验室 Ｉ ＳＯ１５１８９认可指导丛书”，参编著作３部，以第一作者发表 论文４０余篇。
