第 8章　微量 DNA的体外扩增—— PCR技术 ................................. 123第 1节　 PCR技术概述 ......................... 123一、基本原理 ...................................123二、主要步骤 ...................................123三、主要特点 ...................................124第 2节　 PCR的反应体系及操作 ......... 125一、 PCR反应体系 ..........................125二、 PCR的操作及注意事项 ..........125三、 PCR反应条件的优化 ..............127四、 PCR产物的检测分析 ..............128第 3节　 PCR的衍生技术 ..................... 128一、逆转录 -PCR.............................128二、实时荧光定量 PCR ..................129三、特殊 PCR ..................................130第 4节　 PCR技术的应用 ..................... 132一、分子生物学领域 .......................132二、临床医学领域 ...........................133三、其他领域 ...................................134第 5节　实验练习 .................................. 134逆转录 PCR ......................................134

第 9章　阅读遗传天书的**步——测序技术 .................................. 137第 1节　 DNA测序的基本原理 ............ 137第 2节　 DNA测序的常用方法 ............ 138一、酶学法——双脱氧链终止法 .......................................138二、化学（裂解）法—— Maxam-Gilbert测序法 ..........................140
三、酶学法与化学法的比较 ...........141第 3节 DNA测序自动化 .................... 143第 4节实验练习 .................................. 144双脱氧链终止法测定 DNA序列 ....144
转基因技术 ........................... 147第 1节转基因技术概述 ...................... 147一、转基因动物技术的原理 ...........147二、转基因动物技术的成果 ...........148第 2节建立转基因动物的方法 .......... 149一、目的基因的制备 .......................149二、转基因动物的制备方法 ...........149三、转基因小鼠 ...............................156第 3节转基因动物的应用 .................. 156
一、研究基因的结构和功能及其表达与调控 ...............................156二、建立人类疾病动物模型 ...........157三、研究人类疾病基因治疗 ...........157四、利用转基因动物生产生物活性蛋白 ...................................157五、利用转基因动物生产人用器官移植的供体 .......................158六、利用转基因技术改良动物品种和生产性能 .......................158第 4节转基因的安全性问题 .............. 159一、转基因生物的安全性 ...............159二、转基因食品的安全性 ...............159第 5节实验练习 .................................. 160一、转基因动物技术中外源基因的制备 .......................................160二、显微注射 ...................................161

第 11章　置换生物体的某种基因——基因打靶技术 ....................... 165第 1节基因敲除技术概述 .................. 165一、基因敲除技术的建立和发展 ...........................................165二、基因敲除的基本原理 ...............167第 2节基因敲除的方法及进展 .......... 170一、条件性基因敲除法 ...................170二、诱导性基因敲除法 ...................171三、利用随机插入突变进行基因敲除 ...........................................171第 3节基因敲除小鼠的制备过程 ...... 174一、目标载体的构建 .......................174二、 ES细胞培养 .............................174三、 ES细胞的转化 .........................175四、挑克隆 .......................................175五、抗性 ES细胞克隆的冻存 ........175六、 ES细胞基因组 DNA的提取 ...........................................175七、克隆的分析和鉴定 ...................175八、染色体分析 ...............................176九、嵌合体小鼠的制备 ...................176十、品系的建立 ...............................176第 4节基因敲除技术的应用及缺陷 ... 177一、基因敲除技术的应用 ...............177二、基因敲除技术的缺陷 ...............178

第 12章　21世纪的生命科学技术——蛋白质组学技术 ................... 180第 1节　蛋白质组学概论 ...................... 180一、蛋白质组学 ...............................180二、蛋白质组学研究的策略和范围 ...........................................182三、蛋白质组学发展趋势 ...............182第 2节　蛋白质组学技术 ...................... 183一、样品制备 ...................................183二、样品分离技术 ...........................184三、样品鉴定技术 ...........................190第 3节　蛋白质组生物信息学 .............. 195第 4节　实验练习 .................................. 196一、家兔血清蛋白质组二维凝胶电泳技术的建立 .......................196二、正常人尿蛋白质组学研究 .......198

第 13章　蛋白质与核酸相互作用分析 ——EMSA和 ChIP技术 .....200第 1节　电泳迁移阻滞实验（EMSA）... 200 目　　录IX …………一、电泳迁移阻滞实验（ EMSA）的基本原理 ...............................200二、电泳迁移阻滞实验（ EMSA）的基本操作步骤 .......................200第 2节　染色质免疫沉淀（ ChIP）技术 .......................................... 202一、染色质免疫沉淀（ ChIP）技术的基本原理 ...............................202二、染色质免疫沉淀（ ChIP）技术的基本操作步骤 .......................202第 3节　实验练习 .................................. 204一、经 EMSA验证姜黄素可减少 B淋巴细胞核中 NF-κB的量 .....204二、经 ChIP验证姜黄素可减少 B淋巴细胞核中 NF-κB的量 .....207

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