基因工程实验指南 本书特色

《基因工程实验指南》主要介绍植物分子生物学实验中基本技术的原理和操作流程，按照实验进程的顺序，由浅入深，由简至繁，向初学者逐步介绍各种实验操作技术。主要包括植物DNA和RNA的提取和检测、反转录RNA、RT-PCR技术、DNA的扩增、DNA片段的琼脂糖凝胶电泳和回收纯化、聚丙烯酰胺变性凝胶电泳、DNA限制性内切酶酶切分析、大肠杆菌和农杆菌感受态细胞的制备、PCR产物连接、连接产物的转化、农杆菌转化法、挑菌、摇菌、保菌、菌液PCR检测、质粒提取和检测、ABI3730XL测序实验程序、基于毛细管电泳的荧光检测SSR实验程序、半定量 PCR技术、实时荧光定量PCR技术、Southern blotting、Northern bloting、原核表达、Western bolting技术、目标蛋白的亚细胞定位、蛋白互作检测、真空渗透法转化拟南芥、烟草瞬时表达、农杆菌侵染法转化烟草、抗生素溶液的配置等基本的实验技术。《植物基因工程实验指南》是一本既具有一定的理论体系，又具有通用性和指导性作用的实验教学用书。

基因工程实验指南 内容简介

本书主要包括植物DNA和RNA的提取和检测、反转录RNA、RT-PCR技术、DNA的扩增、DNA片段的琼脂糖凝胶电泳和回收纯化、聚丙烯酰胺变性凝胶电泳、DNA限制性内切酶酶切分析、大肠杆菌和农杆菌感受态细胞的制备等内容。

基因工程实验指南 目录

**章 仪器设备 001 分子生物学实验室常用仪器设备简介 001 第二章 核 酸 009 **节 核酸的构成 009 第二节 基因组 DNA 的提取 014 第三节 TENS 法提取微生物基因组 DNA 018 第四节 DNA 的扩增 019 第五节 DNA 片段的琼脂糖凝胶电泳和回收纯化 021 第六节 DNA 重组及鉴定 028 第七节 核酸分子杂交技术 031 第八节 Southern blotting 技术 041 第九节 植物总 RNA 的提取和检测 048 第十节 poly（A） RNA 的提取 051 第十一节 无菌感染期线虫 RNA 的提取 051 第十二节 果蝇总 RNA 的提取 053 第十三节 哺乳动物 RNA 的提取 054 第十四节 反转录 RNA 055 第十五节 半定量 PCR 技术 056 第十六节 实时荧光定量 PCR 技术 057 第十七节 Northern bloting 技术 059 第十八节 核酸染色 061 第十九节 双脱氧链终止法测序技术 064 第二十节 焦磷酸测序（Pyrosequencing） 066 第二十一节 核酸信息分析 068 基因工程 实验指南 第三章 蛋 白 质 080 **节 定量蛋白质组学 084 第二节 植物蛋白的提取 085 第三节 动物蛋白质的提取 088 第四节 动物细胞器蛋白的提取 089 第五节 细菌蛋白质的提取 093 第六节 原核表达 094 第七节 用 IPTG 诱导大肠杆菌表达重组绿色荧光蛋白 098 第八节 蛋白质的定量 099 第九节 聚丙烯酰胺变性凝胶电泳 104 第十节 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 108 第十一节 双向凝胶电泳 110 第十二节 Western bolting 技术 114 第十三节 蛋白质转印实验 半干式 116 第十四节 蛋白质转印实验 电泳液式 118 第十五节 蛋白质染色 119 第十六节 染色质免疫沉淀技术（ChIP） 121 第十七节 凝胶迁移实验（EMSA） 125 第十八节 超迁移 EMSA（Super-Shift EMSA） 129 第十九节 蛋白质序列分析 131 第四章 载体构建及扩繁 132 **节 DNA 限制性内切酶酶切分析 132 第二节 PCR 产物连接 135 第三节 连接产物的转化 136 第四节 挑菌与摇菌 140 第五节 保菌 141 第六节 菌液 PCR 检测 141 第七节 质粒提取 142 第八节 质粒 DNA 的电泳检测 145 第九节 ABI3730XL 测序实验程序 146 目 录 第十节 感受态细胞的制备 151 第十一节 农杆菌转化法 152 第十二节 基于毛细管电泳的荧光检测 SSR 实验程序 153 第五章 蛋白质—蛋白质相互作用 156 **节 目标蛋白的亚细胞定位 156 第二节 酵母双杂交 160 第三节 酵母文库的筛选 164 第四节 免疫共沉淀 165 第五节 GST 融合蛋白进行 Pulldow 实验 168 第六节 双分子荧光互补（BiFC） 169 第七节 荧光共振能量转移 ［Fluorescence resonance energy transfer（FRET）］… 175 第八节 Far Western blotting 印迹法 176 第九节 酵母单杂交实验 179 第十节 原生质体提取及转化步骤 180 第六章 作物转化 183 **节 浸蘸法转化拟南芥 185 第二节 农杆菌侵染法转化烟草 187 第三节 烟草瞬时表达 190 第四节 农杆菌侵染法水稻 191 第五节 生理指标的测定 193 第七章 常用试剂的配制 197 **节 抗生素溶液的配制 197 第二节 常用缓冲液的配制 198 第三节 常用培养基的配制 207 参考文献 211

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